① C18这种型号的色谱柱要怎么保护才妥当
你怎么保存的?
用的时候不能用酸性碱性过强的流动相,用完后一定要用有机相和水相梯度冲洗几遍(可能的话直接冲过夜),尤其是你用的流动相有酸、碱、缓冲液、盐等东西的时候一定要换成蒸馏水好好冲洗。
另外最后保存的时候一定要把柱子里灌满有机溶解(甲醇或乙腈),冲至平衡,一定不能留水在里面(尤其是酸性的水液)。
20个柱体积不够,你是不是用酸碱盐了?你最好用甲醇(乙腈)-水
梯度100%-10%
(每次梯度至少20min)反复洗涤,另外用乙腈保存比甲醇好。
② 液相保护柱的方向
预柱和保护柱是不一样的。保护柱位置在柱前进样阀后主要是做样是过滤一下样品的污染物。预柱的位置是在泵后,主要做样是饱和流动相和过滤流动相的做样,现在很少使用预柱。保护柱的损坏有几个方面一、造成样品峰型变坏,这基本是冲洗不好的。二、造成柱效下降,一般造成下降30%,保护柱就可以报废了。至于色谱柱的冲洗,根据不同的柱子型号、样品性质等方面去具体的冲洗,情况比较复杂。使用前多看看说明书,可以和色谱柱供应商的技术人员沟通,怎么使用。冲洗的时候注意是压力,最好是从小流速开始慢慢提升流速到压力许可的范围。冲洗的时间,大家都有个误区就是冲洗时间用分钟或小时计算是不准确,准确的是流量一般色谱柱的冲洗都要达到10-20倍的柱体积。以上只是大概的过程,具体还有很多的细节,需要一点点的去注意
③ hplc的保护柱是什么样子[最好有图片],一个保护柱多少钱
保护柱是接在色谱柱入口端的,对色谱柱起到保护作用,现在一般情况下不推荐使用,影响压力值,导致压力过高。
④ 色谱柱加了保护柱为什么峰形不好看
保护柱顾名思义主要是为了保护色谱柱的,防止大颗粒,杂质进入色谱柱,不一定能改善峰性,想要峰性好看,液相色谱的话流动相加入改善剂,该变洗脱程序,等都可以,GC的话该变升温程序,或者样品前处理做一下
⑤ 国产的液相色谱柱,哪个牌子的性价比高
国产的液相色谱柱最近一两年的月旭、北京艾杰尔的好像都不错。
⑥ 如何选择液相色谱保护柱
保护柱的作用是用来防止分析柱被一些微粒物质堵塞,及在色谱柱上强吸附组分在色谱柱上吸附。为防止样品的杂质不进入色谱分析柱,不出现不必要的峰展宽,保护柱与分析柱的体积比应在 1:15 至 1:25 之间。 在理想的情况下,保护柱的填料应与分析柱相同,以确保得到分析柱较好的色谱图。尽量使保护柱与分析柱近似。在我们的目录里,将分析柱和与其配套的保护柱列在一起。
⑦ 液相色谱柱色谱柱,预柱和保护柱是什么
预柱和保护柱是不一样的。保护柱位置在柱前进样阀后主要是做样是过滤一下样品的污染物。
预柱的位置是在泵后,主要做样是饱和流动相和过滤流动相的做样,现在很少使用预柱。
保护柱的损坏有几个方面一、造成样品峰型变坏,这基本是冲洗不好的。二、造成柱效下降,一般造成下降30%,保护柱就可以报废了。
至于色谱柱的冲洗,根据不同的柱子型号、样品性质等方面去具体的冲洗,情况比较复杂。使用前多看看说明书,可以和色谱柱供应商的技术人员沟通,怎么使用。
冲洗的时候注意是压力,最好是从小流速开始慢慢提升流速到压力许可的范围。冲洗的时间,大家都有个误区就是冲洗时间用分钟或小时计算是不准确,准确的是流量一般色谱柱的冲洗都要达到10-20倍的柱体积。
以上只是大概的过程,具体还有很多的细节,需要一点点的去注意
⑧ 什么情况下需要更换液相色谱柱有什么现象液相色谱保护柱的使用寿命是多少啊
转载:《分析测试网络网》
色谱柱预防性保护与柱寿命的延长
通常,一根色谱柱在分析数千个样品之后性能仍然保持良好,但也有的柱仅分析不多的样品后几乎就报废了。影响柱寿命和其它问题的因素很多,而有些因素是操作者很难控制的,如果被分析的样品(如分析生物样品),怎么净化样品也是“脏”的,好于色谱柱的影响是非常大的。然而采取下列措施后,在多数情况下总能够人为地减少柱上故障,达到延长柱寿命的目的。
1.加流路过滤器和保护柱
流路过滤器紧靠进样阀后面,位于分析柱前。0.5μm烧结不锈钢片夹在死体积很小的套子中,挡住来源于样品和进样阀垫圈的微粒入柱。因为每个样品都过滤既费事又带来误差,样品量少过滤更困难,因此流路上装过滤器是比较省事的办法。也可以在流路加上保护柱,放在流路过滤器和分析柱之间,或者代替流路过滤器。保护柱的使命是收集阻塞柱进口的来自样品的化学“垃圾”。这程垃圾最终隐藏低柱效能。保护柱应该是小体积,用分析柱的同种填料填装。保护柱使用得当,对分离无影响,好像未装保护柱一样。有些厂商的商品将保护柱都是用短柱、不超过3cm长,内径2~3mm,用较大粒度的填粒(15~20μm)干法填装,会使分析柱的效能有所降低。
2.避免高压冲击
一般色谱柱都能经得起高压,但经不起突然变化的高压冲击。引起高压突然冲击,主要是因样品阀的缓慢转动、泵起动快,柱切换操作等。等面已讨论过,转动六通进样阀时从泵到柱的液流会瞬时切断。在阀的泵侧压力升高,在阀的柱侧压力降低(变化超过20%)。阀转到底后压力突然冲击一下恢复正常,手动进样阀的变化不大,自动进样阀比较慢,可能造成压力冲击,可用氦气代替空气驱动进样阀。因氨压缩系数小。另外泵起动不应过快,可分步操作。如用3ml/min流速,先从1mL/min到2mL/min,然后再3ml/min,每个间隔应大于20s。
柱切换技术的应用也很广泛,切换过程中在色谱柱的入口处压力在零到很大数字之间变化,会很快使柱报废。
3.分离条件
多数色谱柱有很宽的试验条件范围,但具体应用又受到限制,主要是pH值、柱温和流动相的选择。
硅胶为基质的键合相要求pH在2.5~7之间,极端pH的流动相能“溶解”硅胶,使键合相流失。结果非碱性组分峰变宽。如果一定要用高或低pH的流动相,可加预柱(饱和柱)。预柱装在泵和进样阀之间,用分析柱相同的填料填装,或者用普通硅胶。硅胶饱和了流动相。减少了分析柱填料的损失。预柱不要求柱效高,用价格低的一般硅胶疏松地填装,按期检查硅胶的溶解情况。用预柱也有不利的影响。即新流动相难以平衡,保留时间不稳定或稳定慢。使用了预柱一定要加流路过滤器,以防止硅胶微粒引起的麻烦。
以硅胶为基质的柱和阴离子交换柱超过60℃后,会增加对流动相中化学物质的吸附。在高温下用小颗粒柱引起柱床塌陷,降低柱效,改变峰形。在4℃以上使用3μm柱,70℃以上使用5μm柱,会使N值降低50%。
有些流动相中的溶剂不能用于某些柱,如小颗粒的聚苯乙烯填料不能用于非水的排阻色谱。另一方面,有些柱与某些溶剂(如四氢呋喃)一旦达到平衡,不要随意改用其它溶剂。有关这些特殊填料,可以参见有关资料。
水溶性流动相会引起微生物生长而造成阻塞柱。色谱柱应存放在纯有机溶剂或加了50%有机溶剂的水中。凝胶柱可存放在水溶性缓冲液中,同时加0.01%叠氮钠以防止微生物的生长。
4.净化样品
用溶剂溶解的样品,多数组分在一定的时间内能完全从柱中流出来,不会造成危害。
有些样品可能含有微粒物质,样品中的某种组分(如蛋白质)在柱头上沉积下来,组分在固定相上保留很强,溶剂带走柱填料,等等,这些都会造成柱效能下降或柱寿命的影响,有必要采取措施防止柱变坏。
如在光线照射下观察样品是浑浊的或带有乳白色,进样前必须要过滤。虽然流路上装有过滤器和保护柱,但不能代替样品的前处理,样品中过多的微粒会使过滤器和保护柱超载,很快阻塞,或者微粒进入分析柱,所以在进样前必须过滤样品。
若怀疑样品与流动相混合有沉淀而对色谱柱有阻塞,应先试验一下,看样品溶液加入流动相中有无变浑或乳白色出现。如果进样后压力突然增加而后又慢慢减小,表明样品中有微粒或发生沉淀。如有沉淀要设法改变分离条件,包括换样品溶剂和流动相;或处理样品去掉不溶物质。应尽量用小体积的样品。
有些样品能很强地吸附在柱填料上,这样会降低塔板数,改变样品的保留时间、峰形,并且使得基线变差。除了用预处理的方法除去强保留物质外,还要加保护柱,定期清洗色谱柱。有时因为疏忽,用对柱有害的溶剂溶解样品,比如用6mol/L的氢氧化钠溶解样品,这样的样品只要进50~100μL到硅胶基质柱中,硅胶就很快溶解而使柱报废。在这种情况下,应立即中和样品,或除去原溶剂中的有害成分。
5.用强溶剂定期冲洗柱
每次工作结束,用强溶剂冲洗柱是良好的习惯。可用甲醇、乙腈冲反相柱,冲去留在柱上的强吸附组分。用甲醇/水为流动相时也应冲洗。冲洗的程序在以下章节中介绍。
柱头的烧结不锈钢滤片,要求平整,死体积小,孔径适当(2~5μm)。过滤片选择不好会改变色谱峰形,增加阻力或起不到阻挡污染物的作用(填料很快变色)。
此外,对柱硬件的保养也不可忽视。实际操作中应注意以下几点:
1、 接头要配套,用同一厂商的组接件;
2 、接头之间、柱压帽螺母与密封卡磁之间无微粒(填料),否则收紧时容易咬死;
3 、密封卡套与柱管一次性卡紧后再也不能松动,所以拆开柱头再上紧时要小心,不能使卡套移动,原来柱端的不锈钢滤片和垫片的厚度和强度也不能改变(改变这些附件的性能就促使卡套移动);
4 、接头等组接件不要拧得过紧,适当上紧后接上泵试验,分步拧紧,直到不漏为止。还有非常重要的是柱硬件的损坏往往会造成不可挽回的损失。
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⑨ 高效液相色谱柱前保护柱具体怎么用
使用时应该用对应的保护柱,如C18柱用C18的保护柱。
第一次使用时先冲洗干净保护柱,再连接到柱子上。
保护柱的填料和柱子一样,所以也有一定的分离作用,但是会增加死体积。
保护柱一般不会损坏柱子,柱子损坏先看是不是你使用不当造成的,例如C18柱不宜用PH大于7的流动相和纯水系流动相。